I et tidligere prosjekt som testet lokale matforedlingsanlegg for mygg i Thailand, ble det funnet at essensielle oljer (EO) fra Cyperus rotundus, galangal og kanel hadde god myggbekjempende aktivitet mot Aedes aegypti. I et forsøk på å redusere bruken av tradisjonelleinsektmidlerog forbedre kontrollen av resistente myggpopulasjoner, hadde denne studien som mål å identifisere den potensielle synergismen mellom de adulticidale effektene av etylenoksid og toksisiteten til permetrin for Aedes-mygg. aegypti, inkludert pyretroidresistente og sensitive stammer.
For å evaluere den kjemiske sammensetningen og drepende aktiviteten til EO ekstrahert fra rhizomer av C. rotundus og A. galanga og bark av C. verum mot den mottakelige stammen Muang Chiang Mai (MCM-S) og den resistente stammen Pang Mai Dang (PMD-R). ) Voksen aktiv Ae. Aedes aegypti. En voksen bioanalyse av EO-permetrin-blandingen ble også utført på disse Aedes-myggene for å forstå dens synergistiske aktivitet. aegypti-stammer.
Kjemisk karakterisering ved bruk av GC-MS-analysemetoden viste at 48 forbindelser ble identifisert fra EO-ene til C. rotundus, A. galanga og C. verum, som utgjorde henholdsvis 80,22 %, 86,75 % og 97,24 % av de totale komponentene. Cyperen (14,04 %), β-bisabolen (18,27 %) og cinnamaldehyd (64,66 %) er hovedkomponentene i henholdsvis cyperusolje, galangalolje og balsamicoolje. I biologiske voksne drepeanalyser var C. rotundus-, A. galanga- og C. verum EV-er effektive i å drepe Ae. aegypti. MCM-S- og PMD-R LD50-verdiene var henholdsvis 10,05 og 9,57 μg/mg hunner, 7,97 og 7,94 μg/mg hunner, og 3,30 og 3,22 μg/mg hunner. Effektiviteten til MCM-S og PMD-R Ae i å drepe voksne Aedes-mygg i disse EO-ene var nær piperonylbutoksid (PBO-verdier, LD50 = henholdsvis 6,30 og 4,79 μg/mg hunner), men ikke så uttalt som permetrin (LD50-verdier = henholdsvis 0,44 og 3,70 ng/mg hunner). Kombinasjonsbioanalyser fant imidlertid synergi mellom EO og permetrin. Signifikant synergisme med permetrin mot to stammer av Aedes-mygg. Aedes aegypti ble observert i EM av C. rotundus og A. galanga. Tilsetning av C. rotundus- og A. galanga-oljer reduserte LD50-verdiene for permetrin på MCM-S betydelig fra 0,44 til 0,07 ng/mg og 0,11 ng/mg hos hunner, med synergiforhold (SR)-verdier på henholdsvis 6,28 og 4,00. I tillegg reduserte EO-er fra C. rotundus og A. galanga også LD50-verdiene for permetrin på PMD-R betydelig fra henholdsvis 3,70 til 0,42 ng/mg og 0,003 ng/mg hos kvinner, med SR-verdier på henholdsvis 8,81 og 1233,33.
Synergistisk effekt av en EO-permetrin-kombinasjon for å øke toksisiteten hos voksne mot to stammer av Aedes-mygg. Aedes aegypti viser en lovende rolle for etylenoksid som en synergist i å forbedre effekten mot mygg, spesielt der tradisjonelle forbindelser er ineffektive eller upassende.
Aedes aegypti-myggen (Diptera: Culicidae) er hovedvektoren for denguefeber og andre smittsomme virussykdommer som gulfeber, chikungunya og Zika-virus, og utgjør en enorm og vedvarende trussel mot mennesker [1, 2]. Denguevirus er den mest alvorlige patogene hemoragiske feberen som rammer mennesker, med anslagsvis 5–100 millioner tilfeller årlig og mer enn 2,5 milliarder mennesker over hele verden i faresonen [3]. Utbrudd av denne smittsomme sykdommen legger en enorm byrde på befolkningen, helsesystemene og økonomiene i de fleste tropiske land [1]. Ifølge det thailandske helsedepartementet var det 142 925 tilfeller av denguefeber og 141 dødsfall rapportert landsdekkende i 2015, mer enn tre ganger antallet tilfeller og dødsfall i 2014 [4]. Til tross for historiske bevis har denguefeber blitt utryddet eller kraftig redusert av Aedes-myggen. Etter kontroll av Aedes aegypti [5] økte infeksjonsratene dramatisk, og sykdommen spredte seg over hele verden, delvis på grunn av flere tiår med global oppvarming. Eliminering og bekjempelse av Aedes aegypti er relativt vanskelig fordi det er en husmyggvektor som parer seg, spiser, hviler og legger egg i og rundt menneskelige boliger på dagtid. I tillegg har denne myggen evnen til å tilpasse seg miljøendringer eller forstyrrelser forårsaket av naturlige hendelser (som tørke) eller menneskelige kontrolltiltak, og kan gå tilbake til sitt opprinnelige antall [6, 7]. Fordi vaksiner mot denguefeber først nylig har blitt godkjent og det ikke finnes noen spesifikk behandling for denguefeber, avhenger forebygging og reduksjon av risikoen for denguesmitte helt av å kontrollere myggvektorene og eliminere menneskelig kontakt med vektorene.
Spesielt bruker kjemikalier til myggkontroll nå en viktig rolle i folkehelsen som en viktig del av omfattende integrert vektorhåndtering. De mest populære kjemiske metodene inkluderer bruk av lavtoksiske insektmidler som virker mot mygglarver (larvicider) og voksne mygg (adidocider). Larvekontroll gjennom kildereduksjon og regelmessig bruk av kjemiske larvicider som organofosfater og insektvekstregulatorer anses som viktig. Imidlertid er de negative miljøpåvirkningene forbundet med syntetiske plantevernmidler og deres arbeidskrevende og komplekse vedlikehold fortsatt en stor bekymring [8, 9]. Tradisjonell aktiv vektorkontroll, som voksenkontroll, er fortsatt det mest effektive kontrollmiddelet under virusutbrudd fordi det kan utrydde smittsomme sykdomsvektorer raskt og i stor skala, samt redusere levetiden og lang levetiden til lokale vektorpopulasjoner [3], 10]. Fire klasser av kjemiske insektmidler: organokloriner (kun referert til som DDT), organofosfater, karbamater og pyretroider danner grunnlaget for vektorkontrollprogrammer, med pyretroider ansett som den mest vellykkede klassen. De er svært effektive mot forskjellige leddyr og har lav effektivitet. toksisitet for pattedyr. Syntetiske pyretroider utgjør for tiden majoriteten av kommersielle plantevernmidler, og står for omtrent 25 % av det globale plantevernmiddelmarkedet [11, 12]. Permetrin og deltametrin er bredspektrede pyretroidinsekticider som har blitt brukt over hele verden i flere tiår for å kontrollere en rekke skadedyr av landbruksmessig og medisinsk betydning [13, 14]. På 1950-tallet ble DDT valgt som det foretrukne kjemikaliet for Thailands nasjonale folkehelseprogram for myggkontroll. Etter den utbredte bruken av DDT i malariaendemiske områder, faset Thailand gradvis ut bruken av DDT mellom 1995 og 2000 og erstattet det med to pyretroider: permetrin og deltametrin [15, 16]. Disse pyretroidinsekticidene ble introdusert tidlig på 1990-tallet for å kontrollere malaria og denguefeber, først og fremst gjennom behandling av sengenett og bruk av termisk tåke og spray med ultralav toksisitet [14, 17]. De har imidlertid mistet effektivitet på grunn av sterk myggresistens og manglende offentlig etterlevelse på grunn av bekymringer om folkehelsen og miljøpåvirkningen av syntetiske kjemikalier. Dette skaper betydelige utfordringer for suksessen til programmer for kontroll av trusselvektorer [14, 18, 19]. For å gjøre strategien mer effektiv er det nødvendig med rettidige og passende mottiltak. Anbefalte håndteringsprosedyrer inkluderer substitusjon av naturlige stoffer, rotasjon av kjemikalier fra forskjellige klasser, tilsetning av synergister og blanding av kjemikalier eller samtidig bruk av kjemikalier fra forskjellige klasser [14, 20, 21]. Derfor er det et presserende behov for å finne og utvikle et miljøvennlig, praktisk og effektivt alternativ og synergist, og denne studien tar sikte på å imøtekomme dette behovet.
Naturlig avledede insektmidler, spesielt de som er basert på plantekomponenter, har vist potensial i evalueringen av nåværende og fremtidige alternativer for myggkontroll [22, 23, 24]. Flere studier har vist at det er mulig å kontrollere viktige myggvektorer ved å bruke planteprodukter, spesielt essensielle oljer (EO), som drepemidler mot voksne mygg. Adultdrepende egenskaper mot noen viktige myggarter er funnet i mange vegetabilske oljer som selleri, spisskummen, zedoaria, anis, pipepepper, timian, Schinus terebinthifolia, Cymbopogon citratus, Cymbopogon schoenanthus, Cymbopogon giganteus, Chenopodium ambrosioides, Cochlospermum planchonii, Eucalyptus ter eticornis., Eucalyptus citriodora, Cananga odorata og Petroselinum Criscum [25,26,27,28,29,30]. Etylenoksid brukes nå ikke bare alene, men også i kombinasjon med ekstraherte plantestoffer eller eksisterende syntetiske plantevernmidler, noe som gir varierende grad av toksisitet. Kombinasjoner av tradisjonelle insektmidler som organofosfater, karbamater og pyretroider med etylenoksid/planteekstrakter virker synergistisk eller antagonistisk i sine toksiske effekter og har vist seg å være effektive mot sykdomsvektorer og skadedyr [31,32,33,34,35]. Imidlertid har de fleste studier på de synergistiske toksiske effektene av kombinasjoner av fytokjemikalier med eller uten syntetiske kjemikalier blitt utført på landbruksinsekter og skadedyr snarere enn på medisinsk viktige mygg. Dessuten har mesteparten av arbeidet med de synergistiske effektene av plantesyntetiske insektmiddelkombinasjoner mot myggvektorer fokusert på den larvicide effekten.
I en tidligere studie utført av forfatterne som en del av et pågående forskningsprosjekt som screenet intimidicider fra stedegne matplanter i Thailand, ble det funnet at etylenoksider fra Cyperus rotundus, galangal og kanel hadde potensiell aktivitet mot voksne Aedes-mygg. Egypt [36]. Derfor hadde denne studien som mål å evaluere effektiviteten til eteriske oljer isolert fra disse medisinplantene mot Aedes-mygg. aegypti, inkludert pyretroidresistente og sensitive stammer. Den synergistiske effekten av binære blandinger av etylenoksid og syntetiske pyretroider med god effekt hos voksne har også blitt analysert for å redusere bruken av tradisjonelle insektmidler og øke resistensen mot myggvektorer, spesielt mot Aedes. Aedes aegypti. Denne artikkelen rapporterer den kjemiske karakteriseringen av effektive essensielle oljer og deres potensial til å forsterke toksisiteten til syntetisk permetrin mot Aedes-mygg. aegypti i pyretroidsensitive stammer (MCM-S) og resistente stammer (PMD-R).
Jordstengler av C. rotundus og A. galanga og bark av C. verum (fig. 1) brukt til utvinning av essensielle oljer ble kjøpt fra leverandører av urtemedisin i Chiang Mai-provinsen, Thailand. Den vitenskapelige identifiseringen av disse plantene ble oppnådd gjennom samråd med Mr. James Franklin Maxwell, herbariumbotaniker, Institutt for biologi, College of Science, Chiang Mai University (CMU), Chiang Mai-provinsen, Thailand, og forsker Wannari Charoensap. Ved Institutt for farmasi, College of Pharmacy, Carnegie Mellon University, oppbevares prøver av hver plante av Ms. Voucher ved Institutt for parasittologi ved Carnegie Mellon University School of Medicine for fremtidig bruk.
Planteprøvene ble skyggetørket individuelt i 3–5 dager i et åpent rom med aktiv ventilasjon og en omgivelsestemperatur på omtrent 30 ± 5 °C for å fjerne fuktighetsinnhold før ekstraksjon av naturlige essensielle oljer (EO). Totalt 250 g av hvert tørt plantemateriale ble mekanisk malt til et grovt pulver og brukt til å isolere essensielle oljer (EO) ved dampdestillasjon. Destillasjonsapparatet besto av en elektrisk varmemantel, en 3000 ml rundbunnet kolbe, en ekstraksjonskolonne, en kondensator og en Cool Ace-enhet (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Tokyo, Japan). Tilsett 1600 ml destillert vann og 10–15 glassperler til kolben, og varm den deretter opp til omtrent 100 °C ved hjelp av en elektrisk varmeovn i minst 3 timer til destillasjonen er fullført og det ikke produseres mer EO. EO-laget ble separert fra den vandige fasen ved hjelp av en skilletrakt, tørket over vannfritt natriumsulfat (Na2SO4) og lagret i en forseglet brun flaske ved 4 °C inntil kjemisk sammensetning og voksenaktivitet ble undersøkt.
Den kjemiske sammensetningen av essensielle oljer ble utført samtidig med bioanalysen for voksent stoff. Kvalitativ analyse ble utført ved hjelp av et GC-MS-system bestående av en Hewlett-Packard (Wilmington, CA, USA) 7890A gasskromatograf utstyrt med en enkelt kvadrupol masseselektiv detektor (Agilent Technologies, Wilmington, CA, USA) og en MSD 5975C (EI). (Agilent Technologies).
Kromatografisk kolonne – DB-5MS (30 m × ID 0,25 mm × filmtykkelse 0,25 µm). Total GC-MS-kjøretid var 20 minutter. Analysebetingelsene er at injektor- og overføringslinjetemperaturene er henholdsvis 250 og 280 °C; ovnstemperaturen er satt til å øke fra 50 °C til 250 °C med en hastighet på 10 °C/min, bærergassen er helium; strømningshastighet 1,0 ml/min; injeksjonsvolumet er 0,2 µL (1/10 volumprosent i CH2Cl2, splittforhold 100:1); Et elektronioniseringssystem med en ioniseringsenergi på 70 eV brukes til GC-MS-deteksjon. Innsamlingsområdet er 50–550 atommasseenheter (amu) og skannehastigheten er 2,91 skanninger per sekund. Relative prosentandeler av komponenter uttrykkes som prosentandeler normalisert etter toppareal. Identifisering av EO-ingredienser er basert på deres retensjonsindeks (RI). RI ble beregnet ved hjelp av ligningen til Van den Dool og Kratz [37] for n-alkanserien (C8-C40) og sammenlignet med retensjonsindekser fra litteraturen [38] og bibliotekdatabaser (NIST 2008 og Wiley 8NO8). Identiteten til de viste forbindelsene, som struktur og molekylformel, ble bekreftet ved sammenligning med tilgjengelige autentiske prøver.
Analytiske standarder for syntetisk permetrin og piperonylbutoksid (PBO, positiv kontroll i synergistudier) ble kjøpt fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Testsett for voksne fra Verdens helseorganisasjon (WHO) og diagnostiske doser av permetrinimpregnert papir (0,75 %) ble kommersielt kjøpt fra WHOs vektorkontrollsenter i Penang, Malaysia. Alle andre kjemikalier og reagenser som ble brukt var av analytisk kvalitet og ble kjøpt fra lokale institusjoner i Chiang Mai-provinsen, Thailand.
Myggen som ble brukt som testorganismer i den voksne bioanalysen var fritt parende laboratoriemygg av typen Aedes aegypti, inkludert den mottakelige Muang Chiang Mai-stammen (MCM-S) og den resistente Pang Mai Dang-stammen (PMD-R). Stammen MCM-S ble hentet fra lokale prøver samlet i Muang Chiang Mai-området i Chiang Mai-provinsen i Thailand, og har blitt oppbevart på entomologirommet ved Institutt for parasittologi, CMU School of Medicine, siden 1995 [39]. PMD-R-stammen, som viste seg å være resistent mot permetrin, ble isolert fra feltmygg som opprinnelig ble samlet inn fra Ban Pang Mai Dang, Mae Tang-distriktet i Chiang Mai-provinsen i Thailand, og har blitt oppbevart ved samme institutt siden 1997 [40]. PMD-R-stammer ble dyrket under selektivt trykk for å opprettholde resistensnivåer ved periodisk eksponering for 0,75 % permetrin ved bruk av WHO-deteksjonssettet med noen modifikasjoner [41]. Hver stamme av Ae. Aedes aegypti ble kolonisert individuelt i et patogenfritt laboratorium ved 25 ± 2 °C og 80 ± 10 % relativ fuktighet og en lys/mørke-fotoperiode på 14:10 timer. Omtrent 200 larver ble holdt i plastbrett (33 cm lange, 28 cm brede og 9 cm høye) fylt med vann fra springen med en tetthet på 150–200 larver per brett og fôret to ganger daglig med steriliserte hundekjeks. Voksne ormer ble holdt i fuktige bur og kontinuerlig fôret med en 10 % vandig sukroseløsning og en 10 % multivitaminsirupløsning. Hunnmygg suger regelmessig blod for å legge egg. Hunner som er to til fem dager gamle og ikke har blitt blodfôret, kan brukes kontinuerlig i eksperimentelle biologiske analyser av voksne.
En dose-mortalitetsrespons-bioanalyse av EO ble utført på voksne hunnmygg av typen Aedes, aegypti, MCM-S og PMD-R ved bruk av en topisk metode modifisert i henhold til WHOs standardprotokoll for følsomhetstesting [42]. EO fra hver plante ble seriefortynnet med et passende løsemiddel (f.eks. etanol eller aceton) for å oppnå en gradert serie på 4–6 konsentrasjoner. Etter anestesi med karbondioksid (CO2) ble myggene veid individuelt. De bedøvede myggene ble deretter holdt ubevegelige på tørt filterpapir på en spesialtilpasset kaldplate under et stereomikroskop for å forhindre reaktivering under prosedyren. For hver behandling ble 0,1 μl EO-løsning påført hunnens øvre pronotum ved hjelp av en håndholdt Hamilton-mikrodispenser (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, USA). Tjuefem hunner ble behandlet med hver konsentrasjon, med en dødelighet fra 10 % til 95 % for minst fire forskjellige konsentrasjoner. Mygg behandlet med løsemiddel fungerte som kontroll. For å forhindre kontaminering av testprøvene, bytt ut filterpapiret med nytt filterpapir for hver EO som testes. Dosene som brukes i disse bioanalysene uttrykkes i mikrogram EO per milligram levende hunnkroppsvekt. Voksen PBO-aktivitet ble også vurdert på en lignende måte som EO, med PBO brukt som en positiv kontroll i synergistiske eksperimenter. Behandlede mygg i alle grupper ble plassert i plastkopper og gitt 10 % sukrose pluss 10 % multivitaminsirup. Alle bioanalysene ble utført ved 25 ± 2 °C og 80 ± 10 % relativ fuktighet og gjentatt fire ganger med kontrollene. Dødeligheten i løpet av den 24 timer lange oppvekstperioden ble kontrollert og bekreftet av myggens manglende respons på mekanisk stimulering og deretter registrert basert på gjennomsnittet av fire replikater. Eksperimentelle behandlinger ble gjentatt fire ganger for hver testprøve ved bruk av forskjellige grupper med mygg. Resultatene ble oppsummert og brukt til å beregne prosentvis dødelighet, som ble brukt til å bestemme den 24-timers dødelige dosen ved probitanalyse.
Den synergistiske anticidale effekten av EO og permetrin ble vurdert ved hjelp av en lokal toksisitetsanalyseprosedyre [42] som tidligere beskrevet. Bruk aceton eller etanol som løsemiddel for å fremstille permetrin ved ønsket konsentrasjon, samt en binær blanding av EO og permetrin (EO-permetrin: permetrin blandet med EO ved LD25-konsentrasjon). Testsett (permetrin og EO-permetrin) ble evaluert mot MCM-S- og PMD-R-stammer av Ae. Aedes aegypti. Hver av 25 hunnmygg fikk fire doser permetrin for å teste effektiviteten i å drepe voksne mygg, med hver behandling gjentatt fire ganger. For å identifisere kandidat-EO-synergister ble 4 til 6 doser EO-permetrin administrert til hver av 25 hunnmygg, med hver påføring gjentatt fire ganger. PBO-permetrinbehandling (permetrin blandet med LD25-konsentrasjon av PBO) fungerte også som en positiv kontroll. Dosene som brukes i disse bioanalysene er uttrykt i nanogram testprøve per milligram levende hunnkroppsvekt. Fire eksperimentelle evalueringer for hver myggstamme ble utført på individuelt oppdrettede grupper, og dødelighetsdata ble samlet og analysert ved hjelp av Probit for å bestemme en 24-timers dødelig dose.
Dødeligheten ble justert ved hjelp av Abbott-formelen [43]. De justerte dataene ble analysert ved hjelp av Probit-regresjonsanalyse med datastatistikkprogrammet SPSS (versjon 19.0). Letale verdier på 25 %, 50 %, 90 %, 95 % og 99 % (LD25, LD50, LD90, LD95 og LD99, henholdsvis) ble beregnet ved hjelp av de tilsvarende 95 % konfidensintervallene (95 % KI). Signifikansmålinger og forskjeller mellom testprøvene ble vurdert ved hjelp av kji-kvadrat-testen eller Mann-Whitney U-testen innenfor hver biologiske analyse. Resultatene ble ansett som statistisk signifikante ved P.< 0,05. Motstandskoeffisienten (RR) estimeres på LD50-nivået ved hjelp av følgende formel [12]:
RR > 1 indikerer motstand, og RR ≤ 1 indikerer følsomhet. Synergiforholdet (SR) for hver synergistkandidat beregnes som følger [34, 35, 44]:
Denne faktoren deler resultatene inn i tre kategorier: en SR-verdi på 1 ± 0,05 anses å ikke ha noen åpenbar effekt, en SR-verdi på > 1,05 anses å ha en synergistisk effekt, og en SR-verdi på . En lysegul flytende olje kan oppnås ved dampdestillasjon av rhizomene til C. rotundus og A. galanga og barken til C. verum. Utbyttet beregnet på tørrvekt var henholdsvis 0,15 %, 0,27 % (w/w) og 0,54 % (v/v) (tabell 1). GC-MS-studie av den kjemiske sammensetningen av oljer fra C. rotundus, A. galanga og C. verum viste tilstedeværelsen av 19, 17 og 21 forbindelser, som utgjorde henholdsvis 80,22, 86,75 og 97,24 % av alle komponenter (tabell 2). C. lucidum rhizomoljeforbindelser består hovedsakelig av cyperonen (14,04 %), etterfulgt av karralen (9,57 %), α-kapsellan (7,97 %) og α-kapsellan (7,53 %). Den viktigste kjemiske komponenten i galangal rhizomolje er β-bisabolen (18,27 %), etterfulgt av α-bergamoten (16,28 %), 1,8-cineol (10,17 %) og piperonol (10,09 %). Mens cinnamaldehyd (64,66 %) ble identifisert som hovedkomponenten i C. verum barkolje, ble kanelacetat (6,61 %), α-kopaen (5,83 %) og 3-fenylpropionaldehyd (4,09 %) ansett som mindre viktige ingredienser. De kjemiske strukturene til cypern, β-bisabolen og cinnamaldehyd er hovedforbindelsene i henholdsvis C. rotundus, A. galanga og C. verum, som vist i figur 2.
Resultater fra tre OO-er vurderte voksenaktivitet mot Aedes-mygg. aegypti-mygg er vist i tabell 3. Alle EO-er viste seg å ha dødelige effekter på MCM-S Aedes-mygg ved forskjellige typer og doser. Aedes aegypti. Den mest effektive EO-en er C. verum, etterfulgt av A. galanga og C. rotundus med LD50-verdier på henholdsvis 3,30, 7,97 og 10,05 μg/mg MCM-S hunner, noe høyere enn 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) og 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg PMD-R hos kvinner. Dette tilsvarer at PBO har en litt høyere effekt på PMD-R hos voksne enn MSM-S-stammen, med LD50-verdier på henholdsvis 4,79 og 6,30 μg/mg hunner (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Det kan beregnes at LD50-verdiene til C. verum, A. galanga, C. rotundus og PBO mot PMD-R er omtrent 0,98, 0,99, 0,95 og 0,76 ganger lavere enn mot MCM-S. Dette indikerer dermed at følsomheten for PBO og EO er relativt lik mellom de to Aedes-stammene. Selv om PMD-R var mer følsom enn MCM-S, var følsomheten til Aedes aegypti ikke signifikant. I motsetning til dette skilte de to Aedes-stammene seg sterkt i følsomheten for permetrin aegypti (tabell 4). PMD-R viste signifikant resistens mot permetrin (LD50-verdi = 0,44 ng/mg hos kvinner) med en høyere LD50-verdi på 3,70 sammenlignet med MCM-S (LD50-verdi = 0,44 ng/mg hos kvinner) ng/mg hos kvinner (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Selv om PMD-R er mye mindre følsom for permetrin enn MCM-S, er følsomheten for PBO og oljer fra C. verum, A. galanga og C. rotundus litt høyere enn MCM-S.
Som observert i bioanalysen av EO-permetrin-kombinasjonen i den voksne populasjonen, viste binære blandinger av permetrin og EO (LD25) enten synergi (SR-verdi > 1,05) eller ingen effekt (SR-verdi = 1 ± 0,05). Komplekse effekter av en EO-permetrin-blanding på eksperimentelle albinomygg hos voksne. Aedes aegypti-stammene MCM-S og PMD-R er vist i tabell 4 og figur 3. Tilsetning av C. verum-olje viste seg å redusere LD50-verdien for permetrin mot MCM-S noe og øke LD50-verdien mot PMD-R noe til henholdsvis 0,44–0,42 ng/mg hos kvinner og fra 3,70 til 3,85 ng/mg hos kvinner. I motsetning til dette reduserte tilsetning av C. rotundus- og A. galanga-oljer LD50-verdien for permetrin på MCM-S betydelig fra 0,44 til 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) og til 0,11 (U = 0). , Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg kvinner. Basert på LD50-verdiene for MCM-S var SR-verdiene for EO-permetrinblandingen etter tilsetning av C. rotundus- og A. galanga-oljer henholdsvis 6,28 og 4,00. Følgelig sank LD50 for permetrin mot PMD-R signifikant fra 3,70 til 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) og til 0,003 med tilsetning av C. rotundus- og A. galanga-oljer (U = 0). (Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg hunn. SR-verdien for permetrin kombinert med C. rotundus mot PMD-R var 8,81, mens SR-verdien for galangal-permetrin-blandingen var 1233,33. I forhold til MCM-S sank LD50-verdien for den positive kontrollen PBO fra 0,44 til 0,26 ng/mg (hunner) og fra 3,70 ng/mg (hunner) til 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) og PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). SR-verdiene for PBO-permetrinblandingen for stammene MCM-S og PMD-R var henholdsvis 1,69 og 5,69. Disse resultatene indikerer at C. rotundus- og A. galanga-oljer og PBO forsterker permetrin-toksisiteten i større grad enn C. verum-olje for stammene MCM-S og PMD-R.
Voksenaktivitet (LD50) av EO, PBO, permetrin (PE) og deres kombinasjoner mot pyretroidfølsomme (MCM-S) og resistente (PMD-R) stammer av Aedes-mygg. Aedes aegypti
[45]. Syntetiske pyretroider brukes over hele verden for å bekjempe nesten alle leddyr av landbruksmessig og medisinsk betydning. På grunn av de skadelige konsekvensene av bruk av syntetiske insektmidler, spesielt med tanke på utvikling og utbredt resistens hos mygg, samt virkningen på langsiktig helse og miljø, er det nå et presserende behov for å redusere bruken av tradisjonelle syntetiske insektmidler og utvikle alternativer [35, 46, 47]. I tillegg til å beskytte miljøet og menneskers helse, inkluderer fordelene med botaniske insektmidler høy selektivitet, global tilgjengelighet og enkel produksjon og bruk, noe som gjør dem mer attraktive for myggbekjempelse [32, 48, 49]. Denne studien, i tillegg til å belyse de kjemiske egenskapene til effektive essensielle oljer gjennom GC-MS-analyse, vurderte også styrken til voksne essensielle oljer og deres evne til å forsterke toksisiteten til syntetisk permetrin aegypti i pyretroidfølsomme stammer (MCM-S) og resistente stammer (PMD-R).
GC-MS-karakterisering viste at cypern (14,04 %), β-bisabolen (18,27 %) og cinnamaldehyd (64,66 %) var hovedkomponentene i henholdsvis C. rotundus-, A. galanga- og C. verum-oljer. Disse kjemikaliene har vist ulike biologiske aktiviteter. Ahn et al. [50] rapporterte at 6-acetoksycyperen, isolert fra rhizomet til C. rotundus, fungerer som en antitumorforbindelse og kan indusere caspaseavhengig apoptose i eggstokkreftceller. β-bisabolen, ekstrahert fra den essensielle oljen fra myrra, viser spesifikk cytotoksisitet mot humane og musebrysttumorceller både in vitro og in vivo [51]. Cinnamaldehyd, utvunnet fra naturlige ekstrakter eller syntetisert i laboratoriet, har vist seg å ha insektdrepende, antibakterielle, soppdrepende, antiinflammatoriske, immunmodulerende, krefthemmende og antiangiogene aktiviteter [52].
Resultatene av den doseavhengige aktivitetsbioanalysen for voksne viste et godt potensial for de testede EO-ene og viste at Aedes-myggstammene MCM-S og PMD-R hadde lignende følsomhet for EO og PBO. Aedes aegypti. En sammenligning av effektiviteten til EO og permetrin viste at sistnevnte har en sterkere allergidrepende effekt: LD50-verdiene er henholdsvis 0,44 og 3,70 ng/mg hos hunner for stammene MCM-S og PMD-R. Disse funnene støttes av mange studier som viser at naturlig forekommende plantevernmidler, spesielt planteavledede produkter, generelt er mindre effektive enn syntetiske stoffer [31, 34, 35, 53, 54]. Dette kan skyldes at førstnevnte er en kompleks kombinasjon av aktive eller inaktive ingredienser, mens sistnevnte er en renset enkelt aktiv forbindelse. Imidlertid kan mangfoldet og kompleksiteten av naturlige aktive ingredienser med forskjellige virkningsmekanismer øke den biologiske aktiviteten eller hindre utviklingen av resistens i vertspopulasjoner [55, 56, 57]. Mange forskere har rapportert det antimyggpotensialet til C. verum, A. galanga og C. rotundus og deres komponenter som β-bisabolen, cinnamaldehyd og 1,8-cineol [22, 36, 58, 59, 60,61, 62,63,64]. En gjennomgang av litteraturen viste imidlertid at det ikke har vært noen tidligere rapporter om dens synergistiske effekt med permetrin eller andre syntetiske insektmidler mot Aedes-mygg, Aedes aegypti.
I denne studien ble det observert signifikante forskjeller i permetrinfølsomhet mellom de to Aedes-stammene. Aedes aegypti. MCM-S er følsom for permetrin, mens PMD-R er mye mindre følsom for det, med en resistensrate på 8,41. Sammenlignet med følsomheten til MCM-S, er PMD-R mindre følsom for permetrin, men mer følsom for EO, noe som gir grunnlag for videre studier som tar sikte på å øke effektiviteten til permetrin ved å kombinere det med EO. En synergistisk kombinasjonsbasert bioanalyse for effekter på voksne viste at binære blandinger av EO og permetrin reduserte eller økte dødeligheten hos voksne Aedes. Aedes aegypti. Tilsetning av C. verum-olje reduserte LD50-verdien for permetrin mot MCM-S noe, men økte LD50-verdien mot PMD-R noe med SR-verdier på henholdsvis 1,05 og 0,96. Dette indikerer at C. verum-olje ikke har en synergistisk eller antagonistisk effekt på permetrin når den ble testet på MCM-S og PMD-R. I motsetning til dette viste C. rotundus- og A. galanga-oljer en signifikant synergistisk effekt ved å redusere LD50-verdiene for permetrin betydelig på MCM-S eller PMD-R. Når permetrin ble kombinert med EO fra C. rotundus og A. galanga, var SR-verdiene for EO-permetrin-blandingen for MCM-S henholdsvis 6,28 og 4,00. I tillegg, da permetrin ble evaluert mot PMD-R i kombinasjon med C. rotundus (SR = 8,81) eller A. galanga (SR = 1233,33), økte SR-verdiene betydelig. Det er verdt å merke seg at både C. rotundus og A. galanga forsterket toksisiteten til permetrin mot PMD-R Ae. aegypti betydelig. På samme måte ble det funnet at PBO økte toksisiteten til permetrin med SR-verdier på henholdsvis 1,69 og 5,69 for stammene MCM-S og PMD-R. Siden C. rotundus og A. galanga hadde de høyeste SR-verdiene, ble de ansett som de beste synergistene for å forsterke permetrin-toksisiteten på henholdsvis MCM-S og PMD-R.
Flere tidligere studier har rapportert den synergistiske effekten av kombinasjoner av syntetiske insektmidler og planteekstrakter mot ulike myggarter. En larvicid bioassay mot Anopheles Stephensi studert av Kalayanasundaram og Das [65] viste at fenthion, et bredspektret organofosfat, var assosiert med Cleodendron inerme, Pedalium murax og Parthenium hysterophorus. Signifikant synergi ble observert mellom ekstraktene med en synergistisk effekt (SF) på henholdsvis 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 og 2,23. I en larvicid screening av 15 mangrovearter ble petroleumeterekstrakt av mangrovestyltede røtter funnet å være mest effektivt mot Culex quinquefasciatus med en LC50-verdi på 25,7 mg/L [66]. Den synergistiske effekten av dette ekstraktet og det botaniske insektmiddelet pyretrum ble også rapportert å redusere LC50 for pyretrum mot C. quinquefasciatus-larver fra 0,132 mg/L til 0,107 mg/L. I tillegg ble en SF-beregning på 1,23 brukt i denne studien. 34,35,44]. Den kombinerte effektiviteten av Solanum sitronrotekstrakt og flere syntetiske insektmidler (f.eks. fention, cypermetrin (et syntetisk pyretroid) og timethphos (et organofosfor-larvicid)) mot Anopheles-mygg ble evaluert. Stephensi [54] og C. quinquefasciatus [34]. Kombinert bruk av cypermetrin og gul fruktpetroleumeterekstrakt viste en synergistisk effekt på cypermetrin i alle forhold. Det mest effektive forholdet var 1:1 binærkombinasjonen med LC50- og SF-verdier på henholdsvis 0,0054 ppm og 6,83 i forhold til An. Stephen West[54]. Mens en 1:1 binær blanding av S. xanthocarpum og temephos var antagonistisk (SF = 0,6406), viste S. xanthocarpum-fenthion-kombinasjonen (1:1) synergistisk aktivitet mot C. quinquefasciatus med en SF på 1,3125 [34]]. Tong og Blomquist [35] studerte effektene av planteetylenoksid på toksisiteten til karbaryl (et bredspektret karbamat) og permetrin for Aedes-mygg. Aedes aegypti. Resultatene viste at etylenoksid fra agar, sort pepper, einer, helichrysum, sandeltre og sesam økte toksisiteten til karbaryl for Aedes-mygg. SR-verdiene for aegypti-larver varierer fra 1,0 til 7,0. I motsetning til dette var ingen av EO-ene giftige for voksne Aedes-mygg. På dette stadiet er det ikke rapportert om synergistiske effekter for kombinasjonen av Aedes aegypti og EO-karbaryl. PBO ble brukt som en positiv kontroll for å forsterke toksisiteten til karbaryl mot Aedes-mygg. SR-verdiene for Aedes aegypti-larver og voksne er henholdsvis 4,9–9,5 og 2,3. Kun binære blandinger av permetrin og EO eller PBO ble testet for larvicid aktivitet. EO-permetrin-blandingen hadde en antagonistisk effekt, mens PBO-permetrin-blandingen hadde en synergistisk effekt mot Aedes-mygg. Larver av Aedes aegypti. Imidlertid er det ennå ikke utført dose-responseksperimenter og SR-evaluering for PBO-permetrin-blandinger. Selv om det er oppnådd få resultater angående de synergistiske effektene av fytosyntetiske kombinasjoner mot myggvektorer, støtter disse dataene de eksisterende resultatene, som åpner for muligheten for å legge til synergister ikke bare for å redusere den påførte dosen, men også for å øke den drepende effekten. Effektivitet av insekter. I tillegg viste resultatene av denne studien for første gang at C. rotundus- og A. galanga-oljer synergistisk utøver betydelig høyere effekt mot pyretroid-følsomme og pyretroid-resistente stammer av Aedes-mygg sammenlignet med PBO når det kombineres med permetrin-toksisitet. Aedes aegypti. Uventede resultater fra den synergistiske analysen viste imidlertid at C. verum-olje hadde størst anti-voksen aktivitet mot begge Aedes-stammene. Overraskende nok var den toksiske effekten av permetrin på Aedes aegypti utilfredsstillende. Variasjoner i toksiske effekter og synergistiske effekter kan delvis skyldes eksponering for forskjellige typer og nivåer av bioaktive komponenter i disse oljene.
Til tross for forsøk på å forstå hvordan man kan forbedre effektiviteten, er de synergistiske mekanismene fortsatt uklare. Mulige årsaker til den ulik effekt og det synergistiske potensialet kan inkludere forskjeller i den kjemiske sammensetningen av produktene som testes og forskjeller i myggmottakelighet assosiert med resistensstatus og -utvikling. Det er forskjeller mellom de viktigste og mindre etylenoksidkomponentene som ble testet i denne studien, og noen av disse forbindelsene har vist seg å ha frastøtende og toksiske effekter mot en rekke skadedyr og sykdomsvektorer [61,62,64,67,68]. Imidlertid ble hovedforbindelsene karakterisert i C. rotundus-, A. galanga- og C. verum-oljer, som cypern, β-bisabolen og cinnamaldehyd, ikke testet i denne artikkelen for deres anti-voksne og synergistiske aktiviteter mot henholdsvis Ae. Aedes aegypti. Derfor er det behov for fremtidige studier for å isolere de aktive ingrediensene som er tilstede i hver essensiell olje og belyse deres insektdrepende effekt og synergistiske interaksjoner mot denne myggvektoren. Generelt avhenger insektdrepende aktivitet av virkningen og reaksjonen mellom giftstoffer og insektvev, som kan forenkles og deles inn i tre stadier: penetrasjon inn i insektkroppens hud og målorganmembraner, aktivering (= interaksjon med målet) og avgiftning av giftige stoffer [57, 69]. Derfor krever insektmiddelsynergisme som resulterer i økt effektivitet av giftkombinasjoner minst én av disse kategoriene, for eksempel økt penetrasjon, større aktivering av akkumulerte forbindelser eller mindre redusert avgiftning av plantevernmiddelets aktive ingrediens. For eksempel forsinker energitoleranse kutikulapenetrasjon gjennom en fortykket kutikula og biokjemisk resistens, for eksempel forbedret insektmiddelmetabolisme observert i noen resistente insektstammer [70, 71]. Den betydelige effektiviteten til EO-er i å øke toksisiteten til permetrin, spesielt mot PMD-R, kan indikere en løsning på problemet med insektmiddelresistens ved å samhandle med resistensmekanismer [57, 69, 70, 71]. Tong og Blomquist [35] støttet resultatene av denne studien ved å demonstrere en synergistisk interaksjon mellom EO-er og syntetiske plantevernmidler. aegypti finnes det bevis for hemmende aktivitet mot avgiftende enzymer, inkludert cytokrom P450 monooksygenaser og karboksylesteraser, som er nært forbundet med utvikling av resistens mot tradisjonelle plantevernmidler. PBO sies ikke bare å være en metabolsk hemmer av cytokrom P450 monooksygenase, men forbedrer også penetrasjonen av insektmidler, noe som demonstreres ved bruk som en positiv kontroll i synergistiske studier [35, 72]. Interessant nok er 1,8-cineol, en av de viktige komponentene som finnes i galangalolje, kjent for sine toksiske effekter på insektarter [22, 63, 73] og har blitt rapportert å ha synergistiske effekter innen flere områder innen forskning på biologisk aktivitet [74, 75, 76, 77]. I tillegg har 1,8-cineol i kombinasjon med forskjellige legemidler, inkludert curcumin [78], 5-fluorouracil [79], mefenaminsyre [80] og zidovudin [81], også en permeasjonsfremmende effekt in vitro. Den mulige rollen til 1,8-cineol i synergistisk insektdrepende virkning er dermed ikke bare som en aktiv ingrediens, men også som en penetrasjonsforsterker. På grunn av større synergisme med permetrin, spesielt mot PMD-R, kan de synergistiske effektene av galangaolje og trikosantesolje observert i denne studien skyldes interaksjoner med resistensmekanismer, dvs. økt permeabilitet for klor. Pyretroider øker aktiveringen av akkumulerte forbindelser og hemmer avgiftende enzymer som cytokrom P450 monooksygenaser og karboksylesteraser. Imidlertid krever disse aspektene ytterligere studier for å belyse den spesifikke rollen til EO og dens isolerte forbindelser (alene eller i kombinasjon) i synergistiske mekanismer.
I 1977 ble det rapportert om økende nivåer av permetrinresistens i store vektorpopulasjoner i Thailand, og i løpet av de påfølgende tiårene ble bruken av permetrin i stor grad erstattet av andre pyretroidkjemikalier, spesielt de som ble erstattet av deltametrin [82]. Vektorresistens mot deltametrin og andre klasser av insektmidler er imidlertid ekstremt vanlig over hele landet på grunn av overdreven og vedvarende bruk [14, 17, 83, 84, 85, 86]. For å bekjempe dette problemet anbefales det å rotere eller gjenbruke kasserte plantevernmidler som tidligere var effektive og mindre giftige for pattedyr, som permetrin. Selv om bruken av permetrin har blitt redusert i nyere nasjonale myndighetsprogrammer for myggkontroll, kan permetrinresistens fortsatt finnes i myggpopulasjoner. Dette kan skyldes eksponering av mygg for kommersielle husholdningsprodukter for skadedyrkontroll, som hovedsakelig består av permetrin og andre pyretroider [14, 17]. Dermed krever vellykket gjenbruk av permetrin utvikling og implementering av strategier for å redusere vektorresistens. Selv om ingen av de essensielle oljene som ble testet individuelt i denne studien var like effektive som permetrin, resulterte samarbeid med permetrin i imponerende synergistiske effekter. Dette er en lovende indikasjon på at samspillet mellom EO og resistensmekanismer resulterer i at kombinasjonen av permetrin med EO er mer effektiv enn insektmiddelet eller EO alene, spesielt mot PMD-R Ae. Aedes aegypti. Fordelene med synergistiske blandinger når det gjelder å øke effekten, til tross for bruk av lavere doser for vektorkontroll, kan føre til forbedret resistenshåndtering og reduserte kostnader [33, 87]. Ut fra disse resultatene er det gledelig å merke seg at A. galanga og C. rotundus EO var betydelig mer effektive enn PBO i å synergisere permetrin-toksisitet i både MCM-S- og PMD-R-stammer, og er et potensielt alternativ til tradisjonelle ergogene hjelpemidler.
De utvalgte EO-ene hadde betydelige synergistiske effekter i å forsterke voksentoksisiteten mot PMD-R. Ae. aegypti, spesielt galangalolje, har en SR-verdi på opptil 1233,33, noe som indikerer at EO har et bredt potensial som en synergist for å forbedre effektiviteten til permetrin. Dette kan stimulere bruken av et nytt aktivt naturprodukt, som sammen kan øke bruken av svært effektive myggkontrollprodukter. Det avslører også potensialet til etylenoksid som en alternativ synergist for effektivt å forbedre eldre eller tradisjonelle insektmidler for å løse eksisterende resistensproblemer i myggpopulasjoner. Bruk av lett tilgjengelige planter i myggkontrollprogrammer reduserer ikke bare avhengigheten av importerte og dyre materialer, men stimulerer også lokale tiltak for å styrke folkehelsesystemene.
Disse resultatene viser tydelig den betydelige synergistiske effekten som produseres av kombinasjonen av etylenoksid og permetrin. Resultatene fremhever potensialet til etylenoksid som en plantesynergist i myggbekjempelse, noe som øker effektiviteten til permetrin mot mygg, spesielt i resistente populasjoner. Fremtidig utvikling og forskning vil kreve synergistisk bioanalyse av galangal- og alpiniaoljer og deres isolerte forbindelser, kombinasjoner av insektmidler av naturlig eller syntetisk opprinnelse mot flere arter og stadier av mygg, og toksisitetstesting mot ikke-målorganismer. Praktisk bruk av etylenoksid som et levedyktig alternativ til synergisme.
Verdens helseorganisasjon. Global strategi for forebygging og kontroll av denguefeber 2012–2020. Genève: Verdens helseorganisasjon, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Zika-virus: historie, fremvekst, biologi og kontrollutsikter. Antiviral forskning. 2016;130:69–80.
Verdens helseorganisasjon. Faktaark om denguefeber. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Dato for tilgang: 20. januar 2017
Folkehelsedepartementet. Nåværende status for tilfeller av denguefeber og hemoragisk denguefeber i Thailand. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Dato for tilgang: 6. januar 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 år med dengueforebygging og vektorkontroll i Singapore. Plutselig smittsom sykdom. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Identifiser utfordringer og foreslå løsninger for å kontrollere Aedes aegypti-virusvektorer. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centers for Disease Control and Prevention. Denguefeber, entomologi og økologi. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Dato for tilgang: 6. januar 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE Sammenligning av larvicid aktivitet av blader, bark, stilker og røtter av Jatropa curcas (Euphorbiaceae) mot malariavektoren Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Habitatkarakteristikker for Anopheles-larver i malariaområder i malariautryddelsesprogrammet i det sørøstlige Iran. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Suppl 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Gjennomgang av tilnærminger til vektorkontroll, forebygging og kontroll av utbrudd av Vest-Nil-viruset, og utfordringer Europa står overfor. Parasittvektor. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Seleksjon og molekylære mekanismer for cypermetrinresistens hos røde larver (Amsacta albistriga Walker). Biokjemisk fysiologi hos skadedyr. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Laboratoriestudie av permetrinresistens og kryssresistens hos Culex quinquefasciatus mot andre insektmidler. Palastor Research Center. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Pesticidkjemi: Menneskelig velferd og miljø, bind 3: Virkningsmekanisme, metabolisme og toksikologi. New York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. En gjennomgang av insektmiddelresistens og atferdsmessig unngåelse av menneskelige sykdomsvektorer i Thailand. Parasittvektor. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Nåværende mønstre av insektmiddelresistens blant myggvektorer i Thailand. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Status for malaria i Thailand. Sørøst-Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Temporal frekvens av F1534C- og V1016G-knockdown-resistensmutasjoner hos Aedes aegypti-mygg i Chiang Mai, Thailand, og effekten av mutasjoner på effektiviteten av termiske tåkesprayer som inneholder pyretroider. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Insektmiddelresistens i hoveddengue-vektorene Aedes albopictus og Aedes aegypti. Biokjemisk fysiologi av skadedyr. 2012;104:126–31.
Publisert: 08.07.2024